斑马鱼模型评价抗血栓功效（苯肼诱导血栓模型）

【评价原理】

血栓性疾病是指血液在脉管腔或心腔内形成的血块，阻塞血管腔后，可引起血管血流明显减少，甚至造成血流完全中断，如在冠脉内发生血栓，可造成心脏严重缺血，出现不稳定心绞痛，甚至发生心肌梗死。血栓可发生于心血管的任何部位，以静脉为多见。斑马鱼的造血遗传网络在进化上和人类高度保守，适合于血栓形成机制和治疗药物的评价。

苯肼可引起红细胞质膜上的磷脂酰丝氨酸外化，产生超氧自由基，导致红细胞脂膜的氧化损伤，并增加凝血酶的生成速率，诱导血栓形成；此外，苯肼还可促进炎症发生，引起内皮细胞功能障碍，导致高凝状态，最终导致机体血栓形成。

躯干出现血栓后，回心血量便会减少。用邻联茴香胺染色法对红细胞进行特异性染色（呈红色），患有血栓的斑马鱼心脏部位的红细胞较正常斑马鱼明显减少，由于斑马鱼血液系统发育过程透明的特点，在解剖显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和抗血栓药物组。其中正常对照组未摄入苯肼，模型对照组与药物组都摄入了等量的苯肼（苯肼通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。抗血栓药物组在加入苯肼的同时摄入阿司匹林、氯吡格雷之类的抗血栓药物。

服用一段时间抗血栓药物后，我们对斑马鱼整体做红细胞特异性染色，最终分析斑马鱼的红细胞数量（染色强度）。

【结果展示】

图1. 斑马鱼血栓表型图（绿色虚线区域为心脏，心脏内红色为红细胞）

可以看到，模型对照组红细胞数量（染色强度）较正常对照组明显减少，服用抗血栓药物组的红细胞数量（染色强度）与正常对照组比较相似，没有明显的红细胞减少情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗血栓药物组的心脏红细胞数量与未摄入苯肼的正常对照组相似，并未出现模型对照组的心脏红细胞数量减少的情况。

2.本实验证实了阿司匹林和氯吡格雷等具有显著的抗血栓功效。