利用斑马鱼评价孕妇用化妆品安全性

【评价原理】

孕妇用化妆品的潜在安全性区别于常规化妆品主要体现在对化妆品的生殖毒性方面，例如造成卵巢发育的影响，对胎儿的影响等。利用斑马鱼技术可以对孕妇用化妆品进行安全性评价，主要参照GBT 35517-2017评价方法。

【实验方法】

随机选取3 mpf野生型AB品系斑马鱼雌鱼于2 L繁殖盒中，分别水溶给予不同浓度的受试物，每个浓度2缸，每缸5尾，同时设置正常对照组（暴露于养鱼水中），在28℃室温培养，培养21天。用Elisa方法测定卵黄蛋白原含量（VTG是卵黄蛋白的前体，卵黄蛋白是胚胎和幼体早期发育主要的营养来源。通过测定斑马鱼卵黄蛋白原含量，可以评价样品的生殖毒性）；各实验组雌鱼分别于正常繁殖的雄鱼进行交配繁殖，观察各实验组雌鱼的产卵数量，与正常对照组雌鱼比较；随机挑选30枚各实验组斑马鱼雌鱼产下的F1代胚胎（6hpf），于正常条件下培养至5dpf，各实验组F1代胚胎的毒性反应和致畸性数量与正常对照组进行比较；测量并统计卵巢重量，制作卵巢组织切片。上述指标反映孕妇用化妆品的安全性。（周期：45天 供试品用量：约500g ）

【评价指标】

1、VTG卵黄蛋白原含量

2、雌鱼生殖力（产卵数）、子一代发育毒性

3、卵巢重量、卵巢组织切片

【结果表示】

1、VTG卵黄蛋白原含量（柱状图）

图1. VTG卵黄蛋白原含量

2、生殖力（产卵数柱状图 略）、发育毒性

图2. 发育毒性表型图（供试品组与实验对照组相比，出现卵黄囊吸收延迟、肝变性、肠腔异常、心包水肿，提示供试品有发育毒性）

H=Heart；L=Liver；Y=Yolk sac；In=Intestinal tract；J=Jaw；B=Brain；M=Muscle；E=Eye；SB=Swimming bladder

3、卵巢重量（柱状图）、卵巢组织切片

【评价结论】

1、与正常对照组相比， 卵黄蛋白原（VTG）含量减少，雌鱼产卵数减少，子一代表现出发育毒性，卵巢质量下降，成熟卵细胞比例均降低，提示在本实验条件下，供试品具有生殖毒性的风险。

【参考文献】

[1] GBT 35517-2017 化学品 鱼类生殖毒性短期试验方法.